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病毒DNA/RNA提取試劑盒

上架時間:2020-9-11 16:56:59??????瀏覽次數:
  • 產品品牌:???凱杰
  • 產品貨號:???
  • 產品規格:???250T/盒
  • 檢測方法:???
產品介紹

病毒DNA/RNA提取試劑盒

QIAampR UltraSensTM Virus Handbook

廣州健侖生物科技有限公司

(用于從1ml懸液樣品中高效純化可濾性病毒RNA或DNA)

1 試劑盒(250份)

純化柱

250

接收管 2ml

750

AC 緩沖液

230 ml

AR* 緩沖液

90 ml

AB 緩沖液(濃縮)

22 ml

AW1* 緩沖液(濃縮)

95 ml

AW2* 緩沖液(濃縮)

66 ml

AVE 緩沖液

10×2 ml

蛋白酶K

6 ml

Carrier RNA

5×310 μg

2 保存

2.1 純化柱室溫保存(15—25 ℃,以下室溫保存均指該溫度),保質期12個月

2.2干粉狀Carrier RNA 可室溫保存1年;而溶于AVE緩沖液時需要等分,可于-20℃保存1年

2.3 蛋白酶溶液可室溫保存1年,但于2—8℃環境下可延長保存期

3 安全

3.1 衣著:合適的實驗室外套、一次性醫用手套、護目鏡

3.2 注意事項

3.2.1 勿將漂白劑或酸溶液直接加入樣品準備廢液中,當AR緩沖液和AW1緩沖液含有的胍氫可酮和漂白劑結合時會產生高敏性的有害混合物

3.2.2 緩沖液AC、AB、AR、AW1和蛋白酶K均具潛在危險性,操作時需認真謹慎

3.2.3 所有實驗步驟均需在室溫(15—25℃)下進行;樣品液可于2—8℃下保存6小時,在-20℃或-80℃下保存更長時間;同時,樣品需先用內部控制物處理,以防核酸酶降解

3.2.4 純化柱(防交叉污染)

3.2.4.1 加入樣品液時勿弄濕柱子邊緣

3.2.4.2 注意更換有屏障的無核酸酶槍頭

3.2.4.3 防止用槍頭觸碰柱膜

3.2.4.4 稍離心除去蓋上液滴

4、設備與試劑

4.1 乙醇(96—100%)

4.2 無菌、無核酸酶、有屏蔽的槍頭

4.3 無核酸酶離心管(1.5ml和2ml)

4.4 一次性無粉手套

4.5 磷酸鹽緩沖液(PBS,當樣品樣不足1ml時)

4.6 可調速微型離心機(250—1200×g)

4.7 振搖孵育器,可加熱

4.8試劑準備

4.8.1 Carrier RNA

    每管加入310μl緩沖液AVE,制成1μg/μl 溶液,-20℃保存(凍融不能超過3次),每樣品最優Carrier RNA量為5.6μg

4.8.2 緩沖液AB

加入標明的乙醇體積(96—100%),翻轉10次,使得溶液均質,室溫保存

4.8.3 緩沖液AW1*

加入瓶上標明的乙醇體積(96—100%),室溫保存

4.8.4 緩沖液AW2*

加入瓶上標明的乙醇體積(96—100%),室溫保存

5、流程

5.1 1ml處理液

5.2 細胞溶解,目標物沉淀于緩沖液AC中

5.3 在緩沖液AR中重新懸浮,并用蛋白酶K除去蛋白

5.4 加入緩沖液AB,連接,清洗2遍,洗提獲得RNA或DNA

6、實驗操作步驟

6.1 準備

6.1.1 使樣品液溫度平衡至室溫(15—25℃)

6.1.2 校核緩沖液AB、AW1、AW2、Carrier RNA等

6.1.3 使AR緩沖液溫度平衡至60℃(水浴鍋)

6.1.4 所有離心操作需在室溫下進行

6.2 吸取1ml 樣液至2ml 離心管中(管蓋上不能有液體粘附,防污染)

若不足1ml,需用磷酸鹽緩沖液補足,但樣液體積應不少于200μl

6.3 吸取0.8ml 緩沖液AC至樣液表面;吸取5.6μl Carrier RNA液體至管蓋(6.1μl mix)勿將緩沖液AC和Carrier RNA事先混合,且需加入內部控制物,同時推薦與Carrier RNA混合加入(0.5μl + 5.6μl Carrier RNA),即6.1μl mix

6.4 蓋上蓋子,上下翻轉3次,渦旋10秒

6.5 室溫孵育10分鐘(最多15分鐘,不能更久)

6.6 離心3分鐘(1200×g),移除表面液體,收集沉淀(輕彈使沉淀松散,確保蓋上無碎物)

6.7 移入300μl 預熱至60℃的緩沖液AR和20μl 蛋白酶K

   為了減少移液步驟,可將緩沖液與蛋白酶K混合,10份,即3.3ml預熱緩沖液AR和220μl蛋白酶(多10%),漩渦10秒混合后,分裝320μl至每管

6.8漩渦至微粒完全重新懸浮

   每次漩渦兩管(5—10秒),后漩渦另兩管,反復循環3—5次(或更多),有助于蛋白消化

6.9 在振搖孵育器上孵育10分鐘,40℃,最高混勻速度

    10分鐘已足夠長,不允許延長時間

6.10 稍離心,除去蓋上液滴

6.11 移入300μl 緩沖液AB,漩渦混勻,稍離心

6.12 小心移取700μl溶解物至純化柱(裝在一2ml收集管上),勿弄濕邊緣,蓋上蓋子,離心1分鐘(3000—5000×g)

6.13 將純化柱裝在新的2ml收集管上(試劑盒中提供),遺棄舊收集管;小心打開純化柱蓋子,移入500μl緩沖液AW1;離心1分鐘(6000×g)

6.14 將純化柱裝在新的2ml收集管上(試劑盒中提供),遺棄舊收集管;小心打開純化柱蓋子,移入500μl緩沖液AW2;最高速離心3分鐘(20,000×g)

為防止離心減速震動導致的濾液黏著在純化柱上,可額外取一新2ml收集管套上純化柱,最高速離心1min

6.15將純化柱裝在新的1.5ml收集管上(非試劑盒中提供)遺棄舊收集管;小心打開純化柱蓋子,移入30μl緩沖液AVE至純化柱膜上(全部弄濕),離心1分鐘(6000×g)

6.16 重復步驟6.15,當需更多體積時,可適當增加AVE體積,而非提取后稀釋

6.17 RNA保存,-80℃

備注:初步計算,整個實驗過程共需約2—3小時


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【企業名稱 廣州健侖生物科技有限公司
【移動電話 18925052681  13802525278
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【電子郵件】 Service@jianlun.com
【騰訊 Q Q 712628582
【公司網站 www.univaresmexico.com
【公司地址】 廣州市清華科技園創新基地番禺石樓鎮創啟路63號二期2幢一樓

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